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酵素実験
Ⅰ.要約
以下に実験内容の概略を記す。
酵素の抽出と硫安分画
ジャガイモより粗酵素液を抽出、精製し、そこに含まれる酸性ホスファターゼの定量、活性測定を行う。
1)素酵素液の調整、硫安分画
2)酵素の存在確認と活性染色
3)酵素活性の測定
4)活性ユニットと回収率
5)粗抽出液と精製画分のタンパク定量
(2)酵素反応の解析
ジャガイモ酸性ホスファターゼの性質について解析する。
1)酵素濃度と反応速度
2)酵素反応の経時変化
3)酵素反応のpH依存性
4)酵素反応の温度依存性
5)酵素反応の基質濃度依存性
6)阻害剤の影響
Ⅱ.酵素の精製
(1)ジャガイモ塊茎からの酵素抽出、精製
(A)目的
ジャガイモから粗酵素液を抽出し、そこに含まれるタンパク質を2段階の硫安分画によって分画する。その後透析によって塩として含まれる硫安を除く。
(B)方法
1.酵素抽出
100 mMトリス-塩酸緩衝液、50 mM NaCl(pH 7.5) 50 mLに、1.5 mLの20...